· poliacrilamidamosto de xel por monómero de acrilamida, material de partida de polimerización, catalizador e o dereito de mestura de sal e tampón xuntos.
· acrilamidae BIS (N, N '- metileno dobre acrilamida) é a matriz de xel en forma de monómero.
· Persulfato de amonio inicio proceso de polimerización adhesiva.A formulación da cola require unha solución de persulfato de amonio ao 10% preparada en auga.A maior parte da información indicaba a necesidade dun uso activo.Non obstante, a solución ao 10 % pódese colocar a 4 ℃ durante varias semanas sen perda significativa de actividade.Facer ata 10 ml e desbotar cando a cola non se agrega.
Consello: a porcentaxe deacrilamidana secuenciación cola e cola proteica non é o mesmo.Se usa acrilamida prefabricada: solución BIS, asegúrese de obter a botella correcta.
· TEMED (N, N, N', N'- tetrametiletilendiamina) é un catalizador, nunha botella marrón, colocado na neveira.Engade xusto antes de botar cola.
· electroforese de poliacrilamida vidro usado na electroforese debe ser lavado antes e despois de cada vez.Despois da electroforese, lave cun cepillo suave e un pano en auga quente e xabón, enxágüe con auga destilada e deixe secar.
· A humidade e o po poden causar co polímero oco.Antes da electroforese, limpa a placa de vidro cun limpador de vidro e limpa cun cepillo suave.Lavar con auga destilada e secar ben cunha toallita de papel.Enxágüe con etanol ao 70% antes de limpar con papel axuda a limpar e acelerar o secado.Engadir mostras de acrilamida sucesivamente: BIS, auga, solución tampón, persulfato de amonio, TEMED.Agitar ben e botar inmediatamente.
Non é necesario desgasificar a poliacrilamida antes da polimerización.(A acrilamida adoitaba colocarse no baleiro para eliminar as burbullas porque o osíxeno inhibe a polimerización).
Puntas de mostra de puntos de cola horizontal.
· poñer un anaco de papel negro na caixa inferior, fondo negro para facer algún burato de mostra para ver máis claramente.
· Tampón cheo do tanque de cola, xusto sobre o coloide.
· se o bordo ten unha luz, acende as luces, deixa que a luz brille coloide.Extrae a mostra na pipeta.
· utilizando un dispositivo de pipeteo automático.
· en 10-200 mu pódese usar 1 punto de movemento líquido na maioría dos puntos da mostra.Para os buratos de mostra moi pequenos (menos de 10μ1), a cabeza de pipeta longa utilizada para secuenciar a cola é máis conveniente.
· pipetear só inmerso na mostra, inhalando fluído que se move lentamente.A mostra pode parecer pegajosa coa glicerina e un bombeo rápido pode atraer burbullas de aire ao cabezal da pipeta.
· As mostras despois de inhalar a cabeza de pipeteo, moverá a cabeza de fluído suavemente no bordo do tubo ou o papel de limpeza succionará a cabeza líquida fóra das pingas.Teña coidado de non chupar a mostra.
Coloque a mostra no burato da mostra
· Dispositivo de pipeteo para manter un pouco de presión, facer que as mostras se movan lixeiramente cabeza de líquido de desbordamento.
· o cabezal de pipeteo inserido no tampón, lixeiramente máis alto que os orificios puntuais, mantén a presión positiva.A punta da pipeta pódese inserir nun pequeno burato.
· saen as mostras de forma lenta e constante.A punta da pipeta colócase enriba do burato da mostra e a mostra afundirase no burato.Deixa que a mostra se afunda para encher o burato da mostra en lugar de empurrar.
· Unha vez que a última gota de mostra con cabeza líquida, o líquido moverase á segunda pata, levante lentamente o movemento líquido, saia do tampón
Como facer a mostra de cola vertical?
· orificios verticais de mostra de punto de cola formados entre dúas pezas de vidro.En cola moi fina, a cabeza da pipeta nin sequera se pode inserir entre dúas placas de vidro.Mira a glicerina!Coloque a cabeza da pipeta sobre o burato da mostra e a mostra afundirase no burato.
· punto de mostra antes, asegúrese de poñer o punto vertical do burato de mostra de xel de polipropileno acilo é lavado limpo.Lavar a acrilamida sen polimerizar e a auga que poida aparecer no fondo do burato da mostra.A auga pode facer que o burato de mostra sexa significativamente máis pequeno.Use unha xeringa de 25 ou 50 ml e unha agulla de calibre 18.Despeje o tampón de electroforese e lave coidadosamente o burato da mostra.
· pode ser difícil ver o burato da mostra, pero ao mesmo tempo, o resto é fácil.Se hai buracos en exceso, o tampón de mostra pódese probar con azul de bromofenol.
Hora de publicación: 31-mar-2023