Precaucións para a electroforese de xel de poliacrilamida

· PoliacrilamidaO xel debe mediante monómero de acrilamida, material de inicio de polimerización, catalizador e dereito de sal e mestura de tampón.

· acrilamidae bis (n, n '- acrilamida dobre de metileno) é a matriz de xel de forma de monómero.

· Proceso de polimerización de adhesivos de inicio de amonio. A formulación da cola require unha solución de persulfato de amonio 10% preparada na auga. A maior parte da información indicou a necesidade de uso activo. Non obstante, a solución do 10% pódese colocar en 4 ℃ durante varias semanas sen perda de actividade significativa. Facer ata 10 ml e descartar cando a cola non se agrega.

Consello: a porcentaxe deacrilamidaNa secuenciación de cola e cola de proteínas non é o mesmo. Se usa acrilamida premada: solución bis, asegúrese de obter a botella correcta.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilendiamina) é un catalizador, nunha botella marrón, colocada na neveira. Engade xusto antes de verter cola.

· A electroforese de poliacrilamida usada o vidro usado na electroforese debe lavarse antes e despois de cada vez. Despois da electroforese, lave cun cepillo suave e un pano en auga xabonosa quente, enxágüe con auga destilada e queda seca.

· A humidade e o po poden causar con polímero oco. Antes da electroforese, limpe a placa de vidro con limpador de vidro e limpala cun cepillo suave. Lave con auga destilada e seca ben cun limpeza de papel. Enxágüe cun 70% de etanol antes de limpar con papel axuda a limpar e acelerar o secado. Engade mostras de acrilamida sucesivamente: bis, auga, solución tampón, persulfato de amonio, TEMED. Sacude ben e verta inmediatamente.

Non é necesario desgastar a poliacrilamida antes da polimerización. (A acrilamida adoitaba colocarse nun baleiro para eliminar burbullas porque o osíxeno inhibe a polimerización.)

Consellos de mostra de punto de cola horizontal.

· Poña un anaco de papel negro na caixa inferior, fondo negro para facer algún burato para ver con máis claridade.
· Búfer cheo de tanque de cola, algo máis do coloide.
· Se o bordo ten unha luz, acenda as luces, deixe que a luz brilla coloide. Debuxe a mostra na pipeta.
· Usando un dispositivo de canalización automática.
· En 10-200 mu 1 punto de movemento de líquido pódese usar na maioría dos puntos da mostra. Para buracos de mostra moi pequenos (menos de 10μ1), a cabeza de pipeta longa usada para a secuenciación de cola é máis conveniente.

· A canalización só inmersa na mostra, inhalando o fluído en movemento lentamente. A mostra pode parecer pegajosa con glicerina e o bombeo rápido pode atraer burbullas de aire na cabeza da pipeta.

· As mostras despois de inhalar a cabeza de canalización, moverán a cabeza de fluído suavemente no bordo do tubo ou limpando o papel de líquido chupar a cabeza líquida fóra das pingas. Teña coidado de non chupar a mostra.

Coloque a mostra no burato da mostra

· Dispositivo de canalización para manter un pouco de presión, facer que as mostras poidan mover lixeiramente a cabeza líquida desbordada.
· A cabeza de canalización inserida no tampón, lixeiramente superior aos buracos, mantén a presión positiva. A punta da pipeta pódese inserir nun pequeno burato.
· Lentamente e constantemente as mostras. A punta da pipeta sitúase por encima do burato da mostra do punto e a mostra afundirase no burato. Deixa que a mostra se afunde para encher o burato da mostra en vez de empurrar.
· Unha vez que a última gota de mostra con cabeza líquida, o líquido pasará á segunda perna, levanta lentamente a xogada de líquido, desprázase do tampón

Como facer a mostraxe de cola vertical?

· Formáronse os buracos de mostra de pegamento vertical formados entre dúas pezas de vidro. En cola moi fina, a cabeza da pipeta non se pode inserir entre dúas placas de vidro. Mira a glicerina! Coloque a cabeza de pipeta sobre o burato da mostra e a mostra afundirase no burato.
· Mostra de puntos antes, asegúrese de poñer o punto vertical do burato de mostra de xel de polipropileno acilo está limpo. Lava a acrilamida non polimerizada e a auga que pode aparecer na parte inferior do burato da mostra. A auga pode facer que o burato da mostra sexa significativamente menor. Use unha xeringa de 25ml ou 50ml e unha agulla de calibre 18. Despeje no tampón de electroforese e lave coidadosamente o burato da mostra.
· Pode ser difícil ver o burato da mostra, pero ao mesmo tempo, o resto é fácil. Se hai exceso de buracos, o tampón da mostra pódese probar con azul bromofenol.